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ACQUITY BEH色譜柱堵塞了怎么辦?教你如何讓色譜柱重獲新生

更新時間:2022-11-24      點擊次數:3235

ACQUITY BEH色譜柱清洗、再生和存放


a. 清洗與再生

如果發生峰形改變、譜峰分叉、出現肩峰、保留時間改變、分離度變化或柱壓升高,說明色譜柱可能已被污染。通常情況下,用純有機溶劑進行沖洗(小心避免緩沖鹽出現析出)就足以去除污染物。如果沖洗不能解決問題,可采用以下清洗和再生步驟。

 

ACQUITY UPLC BEH 100MM.jpg


根據樣品和/或您認為污染色譜柱的物質的性質,選擇與之匹配的常規清洗方法(見表3)。

 

3.ACQUITY BEH色譜柱的推薦pH和溫度限值

色譜柱

粒徑

孔徑

表面積

pH限值

溫度限值

配基密度

碳載量%

低pH

高pH

BEH C18

1.7μm

130Å

185m2/g

1-12

80℃

60℃

3.1μmol/m2

17.7

BEH C8

1.7μm

130Å

185m2/g

1-12

60℃

60℃

3.1μmol/m2

12.8

BEH苯基柱

1.7μm

130Å

185m2/g

1-12

80℃

60℃

3.0μmol/m2

14.5

BEH Shield RP18

1.7μm

130Å

185m2/g

2-11

50℃

45℃

3.2μmol/m2

16.6

BEH HILIC

1.7μm

130Å

185m2/g

1-9

60℃

45℃

BEH Amide

1.7μm

130Å

185m2/g

2-11

90℃

90℃

7.5μmol/m2

12

 

 

請使用20倍柱體積的溶劑沖洗色譜柱。升高柱溫可提高清洗效率。如果清洗和再生之后色譜柱性能仍然很差,請致電我們獲得更多支持。

 

50:50乙腈/水沖洗BEH HILIC色譜柱,去除極性污染物。如果此沖洗操作不能解決問題,可用5:95乙腈:水沖洗色譜柱。

 

要清洗BEH Amide色譜柱中的極性污染物,請運行10 min內水從0增加到100%的梯度。請注意,隨著水的比例上升,柱壓也將迅速增大。在含水量大于60%的條件下運行時,請降低流速。必要時請重復該操作。

 

ACQUITY UPLC BEH 150MM.jpg


4.反相色譜柱清洗順序

極性樣品

非極性樣品*

蛋白質樣品

1.水

1.異丙醇(或適當比例的異丙醇/水混合溶液** )

選項1:重復進幾針二甲基亞砜(DM SO)

2.甲醇

2.四氫呋喃(THF)

選項2:使用10%~90% B的梯度,其中:A = 0.1%三氟(TFA)水溶液,B = 0.1%三氟酸(TFA)乙腈(CH3CN)溶液

3.四氫呋喃(THF)

3.二氯甲烷

4.甲醇

4.正己烷

5.水

5.異丙醇(然后使用適當比例的異丙醇/水混合溶液** )

選項3:使用7 M鹽酸胍或7 M尿素沖洗色譜柱

6.流動相

6.流動相

 










 

* 在使用THF或正己烷之前,確保系統與這些溶劑兼容。只有在利用純反相有機溶劑(如乙腈)無法清洗色譜柱時,方可考慮使用諸如THF或正己烷之類的溶劑。降低流速,使用較低的操作溫度并盡量減少系統與THF/或正己烷的接觸。

** 使用低有機溶劑含量的溶液,以避免出現緩沖鹽析出。

b. 存放

如果反相色譜柱需要在室溫下存放超過四天,應將其保存于100%乙腈中。對于高溫應用,請在使用后立即使用100%乙腈保存色譜柱,以便盡可能延長色譜柱使用壽命。切勿使用

緩沖鹽保存色譜柱。如果流動相中含有緩沖鹽,則先用10倍柱體積(常規色譜柱體積請參見表1)的HPLC級水沖洗反相ACQUITY BEH色譜柱,再用100%乙腈替換柱內的水,然后

儲存。如果不執行這個中間步驟,在引入100%乙腈時,色譜柱內可能會出現緩沖鹽析出。BEH Amide色譜柱在保存100%乙腈前先進行梯度沖洗至100%乙腈以將所有水相溶劑從柱中沖洗干凈。將色譜柱完quan密封,防止柱床因溶劑蒸發而變干。

 

ACQUITY UPLC BEH.jpg


如果BEH HILIC色譜柱需要存放超過四天,應將其保存于95:5乙腈:水中。切勿使用緩沖液保存色譜柱。如果流動相中含有緩沖鹽,則用10倍柱體積的95:5乙腈:水沖洗色譜柱(常規

色譜柱體積請參見表1)。

 

注:如果色譜柱運行了含甲酸鹽(如甲酸銨、甲酸等)的流動相,并且之后使用100%乙腈進行沖洗,那么在重新安裝色譜柱并再次運行含甲酸鹽的流動相時,柱平衡花費的時間可能略長。

 

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