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ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier BEH色譜柱的操作使用

更新時間:2024-10-15      點擊次數(shù):1523

a. 樣品前處理

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度,優(yōu)先選用運行分析時擬用的流動相或比它更弱的流動相來制備樣品。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性配件包,否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。

3. 如果樣品不溶于流動相,請確保樣品、溶劑和流動相可以混溶,以避免樣品和/或緩沖鹽析出。

4. 0.2μm濾膜過濾樣品,去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑(如乙腈、甲醇等),請確保濾膜材料不溶于該溶劑。請聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。

或者,可以考慮在8000 rpm下離心樣品溶液20 min,然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

5. 對于親水作用色譜(HILIC)分離,樣品必須用高百分比的有機(jī)溶劑制備(例如95%乙腈)。請參閱“BEH HILIC色譜柱入門"“Amide色譜柱入門"章節(jié)獲取詳細(xì)信息。

b. pH范圍

  ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作pH范圍如下:采用BEH C18BEH C8BEH苯基填料為1~12;采用BEH Shield RP18BEHAmide填料為2~11;采用BEH HILIC填料為1~9。表2列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外,柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如,在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會縮短色譜柱壽命。

c. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能,請使用高品質(zhì)色譜級溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2μm濾膜過濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會堵塞色譜柱入口篩板,這會導(dǎo)致操作壓力增大,性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息,請參閱第VI節(jié)。

d. 壓力

注:在壓力、pH/或溫度的極值下運行會縮短色譜柱使用壽命。

e. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率,ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作溫度范圍為20°C~90°C。在高pH條件下操作時,建議降低操作溫度以延長色譜柱使用壽命。在較高溫度下(如70 °C以上)運行也可能縮短色譜柱使用壽命。在HILIC分析中,BEH Amide色譜柱可以在高pH值和高溫條件下使用,不會出現(xiàn)問題(請參閱“BEH Amide色譜柱入門"章節(jié)的推薦條件)。

2.使用ACQUITY BEH色譜柱時的推薦緩沖鹽

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