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親水作用色譜柱操作建議

更新時間:2025-04-11      點擊次數:835

親水作用色譜柱操作建議(CORTECS HILICBEH HILICBEH Amide)

 

ACQUITY UPLC BEH 150MM.jpg


親水作用色譜柱的使用方法與反相色譜柱有很大的不同,需要加以注意。

 

1) 樣品制備

應盡可能使用較高比例的有機溶劑(95%乙腈),以避免溶劑效應。如果存在樣品溶解問題,應至少使用50/50乙腈/水,并減少進樣體積。

 

2) 柱平衡

初次使用時,先用50倍柱體積的50/50乙腈/(CORTECS HILICBEH HILIC,如果流動相條件含有緩沖鹽則需添加10 mM流動相緩沖鹽)60/40乙腈/(BEH Amide)對柱進行老化;

開始進樣前,用20倍柱體積的起始流動相條件進行平衡;

如果使用梯度條件,每次梯度之間,用8-10倍柱體積的起始流動相條件再次平衡。

沒有充分老化平衡的色譜柱,將會出現柱效較低、以及保留時間漂移的問題。

 

3) 柱清洗再生

對于ACQUITY UPLC BEH HILICCORTECS HILIC色譜柱,用50/50乙腈/水清洗以去除極性污染物。如果不能解決問題,用5/95的乙腈/水沖洗;

對于ACQUITY UPLC Amide色譜柱,可采用10分鐘的梯度洗脫從100%有機相到100%水相。值得注意的是當水相比例升高,壓力將迅速增加,當水相比例超過60%時需降低流速。如果有必要可重復清洗。

 

4) 柱保存

先將緩沖鹽從色譜柱內沖洗干凈,然后將色譜柱保存在95/5乙腈/(BEH HILICCORTECS HILIC)100%乙腈(BEH Amide)中。


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